Впервые об анализе методом ПЦР заговорили в 1983 году. Данная методика была разработана Кэри Мюллисом и сотрудниками его лаборатории. С тех пор популярность исследования неуклонно возрастает, т.к. оно обладает существенным рядом преимуществ перед другими методиками.

На сегодняшний день ПЦР диагностика является эталоном или стандартом в выявлении инфекций и возбудителей заболеваний, особенно протекающих бессимптомно. В первую очередь это доклиническая диагностика.

Проведение анализа в ПЦР машине

Сущность ПЦР анализа заключается в том, что в пробирке клонируются (многократно увеличиваются) последовательности нуклеиновых кислот (ДНК или РНК), характерных для определенного вида возбудителей.

Аббревиатура ПЦР расшифровывается как - полимеразно цепная реакция.

Главная отличительная черта данного метода – это амплификация, т.е. создание огромного числа копий необходимого гена или его фрагмента. Все это производится вне организма, т.е. в пробирке.

Так, если проведено 20 циклов ПЦР, то получается примерно 1 миллион копий и более. Это позволяет обнаружить инфекцию даже при её незначительном количестве в исходном материале, когда другие методы анализа бессильны. Это определяет высокую чувствительность данного метода.

Простыми словами можно провести такую аналогию - одну маленькую песчинку на полу вы не заметите, но после увеличения количества песчинок в миллион раз (проведение ПЦР), кучка песка уже будет хорошо видна.

Основными преимуществами анализа на инфекции ПЦР-методом являются:

• наиболее высокая чувствительность и специфичность в сравнении с другими методами, используемыми для выявления инфекционных агентов;
• возможность выявления микроорганизмов в разнообразных биологических материалах (кровь, моча, влагалищный секрет, слюна и т.д.);
• возможность выявить одновременно несколько причинных микроорганизмов, если таковое наблюдается. Для сравнения - использование бактериологических методов не дает такой возможности, т.к. необходимо применение различных сред для выращивания различных болезнетворных микробов;
• возможность транспортировки биологического материала, т.к. для выявления возбудителя не обязательно сохранять его в живом виде;
• скоростьвыполнения анализа;
• точность проводимой этиологической диагностики;
• возможность количественного определения возбудителей - особенно актуально для условно-патогенных микробов, которые только по достижении определенной концентрации способны вызывать заболевание;
• способность контролировать течение инфекционного процесса при проведении лечения.

Анализ ПЦР на инфекции

В настоящее время методом полимерзной цепной реакции определяют большинство половых (и других) инфекционных заболеваний. Диагностика получила широкое распространение за счет своей высокой чувствительности и специфичности.

Особенно большой популярностью пользуется анализ ПЦР на хламидии.

Это связано с тем, что данные микроорганизмы обитают внутриклеточно, что создает определенные трудности в их обнаружении.

ПЦР-диагностика позволяет выявлять даже минимальное количество хламидий, которые, как правило, еще не приводят к появлению клинических симптомов. Даже наличие только 2 молекул нуклеиновых кислот в исследуемом материале позволяет выявить причинную инфекцию.

А это залог успешного лечения, которое начинается еще на доклиническом этапе.

Также производится определение инфекций:

• вирусные гепатиты;
• туберкулез;
• клещевой энцефалит;
• различные венерические заболевания и т.д.

ПЦР-диагностика позволяет решать и ряд других важных задач:

• мониторинг терапии и оценка ее эффективности;
• определение «нагрузки вирусами», на основании которой производится индивидуальный подбор дозы препарата;
• выявление штаммов микроорганизмов, отличающихся фармакологической устойчивостью (нечувствительностью к лекарственным препаратам).

Подготовка к сдаче анализа

Целенаправленно готовиться к сдаче анализа, который будет проводиться методом ПЦР, не требуется. Однако очень важно, чтобы специалист производил забор материала с соблюдением всех необходимых условий стерильности.

Так, например, для взятия крови следует применять специальные вакуумные системы, для взятия секрета половых органов следует использовать специальные пробирки и т.д.

В некоторых случаях в лабораторию материал следует транспортировать. Чтобы это сделать правильно, необходимо герметично закрыть емкость с биологическим материалом. Это позволит предупредить проникновение туда иных микроорганизмов, обитающих во внешней среде.

Результаты ПЦР-анализа могут быть двух вариантов:

• положительный – возбудитель обнаружен;
• отрицательный – возбудитель не выявлен.

Следует знать - даже при отсутствии клинической симптоматики может быть получен положительный результат.

В данном случае ориентироваться необходимо на данные полимеразной реакции, т.к. она позволяет выявить заболевание на доклинической стадии.

Иногда может быть получен сомнительный ответ, когда количество выявленных копий соответствует верхней границе нормы. Чтобы уточнить причину заболевания, следует повторить анализ, уделив особое внимание условиям сбора биологического материала.

Насколько точна ПЦР-диагностика?

Основные преимущества ПЦР-диагностики можно сформулировать в виде нескольких тезисов:

• возможность получения огромного числа копий патогенных микроорганизмов;
• большое количество копий – это залог успешного секвенирования (выявления).

Это обеспечивает высокую точность ПЦР-анализа для обнаружения внутриклеточных возбудителей и медленно растущих микроорганизмов.

Поэтому метод особенно информативен для выявления туберкулезных микобактерий и других подобных инфекционных агентов. Он обладает высочайшей точностью и не нуждается в перепроверке полученных результатов (кроме казуистических случаев).

Для получения наиболее достоверных результатов необходимо выполнение двух основных условий, которые предупреждают экзогенное (внешнее) инфицирование:

• правильный забор материала;
• правильная транспортировка.

В конце статьи см.
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).
В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.
Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

• ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
• два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
• термостабильная ДНК-полимераза;
• дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
• ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
• буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе - приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.
Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 - 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией - разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.
Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии - 0,5 - 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это - стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.
Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота - биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках - долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота - биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев - нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды - основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) - гуанин, цитозиновый (C) - цитозин, тиминовый (Т) - тимин, урациловый (U) - урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов - A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа - A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК - рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. - М.: Мир, 2002. - 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9
2. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия - Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. - 496 с.; илл. ISBN 5-94087-098-8
3. Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы - М.: Наука, 2005 - В 2 т. - ISBN 5-02-033278-X

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

В диагностике инфекционных заболеваний используются различные лабораторные методы обнаружения возбудителей. Одним из наиболее прогрессивных, специфичных и точных лабораторных тестов является анализ методом ПЦР, позволяющий определять наличие возбудителей в крови и других видах биологического материала, обнаруживать микроорганизмы на первых стадиях развития болезни, в случаях носительства инфекции.

Анализ на ПЦР на специальной аппаратуре

Как проводят диагностические тесты с помощью ПЦР

Полимеразная цепная реакция – лабораторный молекулярно-биологический способ обнаружения ДНК бактерий и грибов, ДНК и РНК вирусов. Основа ПЦР – особая ферментативная реакция, протекающая в присутствии специальных ферментов и веществ молекулярной природы. Благодаря тому, что метод способен зафиксировать наличие непосредственно возбудителя болезни, его считают наиболее информативным и чувствительным при выявлении латентных инфекций и носительства по сравнению со всеми другими диагностическими методами.

Анализ биологических образцов с помощью ПЦР-тестирования позволяет быстро обнаружить присутствие самих бактерий и вирусов.

Остальные лабораторные способы диагностики, как правило, определяют косвенные признаки инфекции, либо требуют длительной процедуры проверки.

Основными стадиями ПЦР-методики являются:

• взятие биологического материала, его доставка в диагностическую лабораторию,
• выделение генетического материала бактерий и вирусов из взятого материала,
• непосредственно анализ ПЦР и расшифровка полученных данных.

Для постановки реакции ПЦР используют образцы жидкостей, тканей, секретов, в которых предполагают присутствие болезнетворных микроорганизмов. Чаще всего в качестве образцов для тестирования используют венозную кровь, плазму или сыворотку крови. В лаборатории бактериальные и вирусные частицы отделяют от остальных компонентов и с использованием специальных реагентов выделяют из них молекулы ДНК или РНК.

Полимеразная цепная реакция

На следующей стадии эти генетические молекулы многократно размножают в специальных приборах. Для этого используют особые ферменты и молекулы, которые позволяют искусственно размножить строго определенный вид ДНК, принадлежащий только одному конкретному возбудителю. В результате реакции образуется огромное количество коротких фрагментов ДНК, идентичных тем, что входят в состав вирусов и бактерий.

На третьем этапе накопленные фрагменты обнаруживают с помощью специальных красителей и оборудования для детекции. Если в исходном образце содержались болезнетворные микроорганизмы, в результате реакции образуется специфический продукт, и анализ показывает положительный результат. Если возбудителя в материале не было, продукт реакции не синтезируется и тест дает отрицательный результат.

Тестирование методом ПЦР – один из самых быстрых способов диагностики инфекций. Полный цикл проверки материала занимает от нескольких часов до одного дня.

Метод ПЦР — суть

Именно использование в реакции многократного размножения молекул ДНК строго определенного вида позволяет точно определять наличие микроорганизмов в биологических образцах с предельной чувствительностью. Даже незначительная концентрация инфекционных агентов в тканях и жидкостях организма может привести к синтезу огромного количества продукта реакции и положительному заключению.

Какие инфекции определяют ПЦР-тестом

С помощью технологии ПЦР детектируют присутствие самых разных бактерий, дрожжеподобных клеток, вирусных частиц. В современной диагностической практике анализ ПЦР наиболее распространен для выявления возбудителей следующих заболеваний:

• ВИЧ-инфекция (СПИД),
• гепатиты (гепатит B, гепатит С и другие более редкие разновидности),
• цитомегаловирусная инфекция,
• практически все инфекционные заболевания мочеполового тракта,
• кандидоз,
• микоплазмоз,
• инфекции, вызванные герпес-вирусами,
• папилломовирусная инфекция,
• токсоплазмоз,
• кишечные заболевания,
• дифтерия,
• туберкулез,
• редкие очаговые инфекции,
• мононуклеоз и многие другие.

Полимеразная цепная реакция – самый распространенный, достоверный и быстрый метод обнаружения половых инфекций, гепатита, ВИЧ, папиллом и других заболеваний.

Для многих диагностируемых заболеваний ПЦР не является единственным способом диагностики. Диагноз подтверждается врачом только при наблюдении других признаков болезни.

Схема выявления вирусов и бактерий

Но для целого ряда случаев полимеразная реакция является «золотым стандартом» лабораторной диагностики.

Список обнаруживаемых с помощью ПЦР инфекций расширяется с каждым годом. Развитие метода уже позволило определять одновременно несколько возбудителей. Это послужило распространению комплексных программ обследований. Среди них: комплексное исследование микрофлоры на бактериальный вагиноз, определение TORCH-инфекций, выявление папиллом человека высокого и низкого канцерогенного риска. Кроме того, анализ крови ПЦР входит в обязательный госпитальный комплекс диагностики.

С использованием полимеразной реакции ученые смогли определить молекулы, сигнализирующие о развитии разных форм злокачественных опухолей — онкомаркеры. Благодаря чему метод нашел применение в раннем выявлении рака. ПЦР-тесты активно используют для обнаружения наследственных генетических дефектов, в том числе в пренатальной диагностике и в процессе планирования беременности.

Особенности биологического материала для анализа ПЦР

Забор определенного вида материала для исследования определяется типом инфекции, которую хотят диагностировать в результате тестирования. В качестве исследуемых образцов выполняют забор:

• венозной крови,
• слюны,
• соскобов, например из цервикального канала, с внутренней стороны щеки,
• образцов слизи,
• мочи,
• плевральной жидкости,
• образцов спермы и секрета предстательной железы,
• мокроты и бронхо-легочного лаважа,
• выделений из уретры.

Результаты могут расшифровать только специалисты

В случае отдельных инфекций и при особых показаниях врачи могут назначить анализ спинномозговой жидкости. В обнаружении внутриутробных заболеваний применяют образцы плаценты и околоплодных вод.

В общем случае для диагностики с помощью ПЦР используют тот вид материала, в котором с большой вероятностью присутствует непосредственно сам возбудитель заболевания. Вид биологического материала определяется врачом при направлении на анализ.

Чтобы анализ был точным и правильным необходима простая подготовка перед забором материала и соблюдение особой чистоты взятия образов и проведения самого анализа.

Для получения точного результата анализа следует придерживаться нескольких правил подготовки и забора материала на исследование:

• отменить половые контакты за несколько дней до забора материала из половых органов и в случае диагностики половых инфекций по анализу крови,
• венозную кровь на ПЦР анализ сдавать утром, перед сдачей не употреблять напитки и еду,
• не курить минимум за два часа до сдачи крови,
• мочу собирать строго в стерильный контейнер сразу после сна.

Важно! Прием антибиотиков и других лекарственных препаратов может исказить результаты анализа. Перед сдачей материала следует проконсультироваться с врачом.

Если для выполнения анализа ПЦР планируется забор материала из половых органов, рекомендуется отменить использование антибактериальных гигиенических средств и сильнодействующих лекарственных препаратов по согласованию с лечащим врачом.

Как расшифровать результат анализа ПЦР

Результаты ПЦР-анализа обычно представлены в качественном формате. Инфекционный агент либо обнаруживается в образце биологического материала, либо не детектируется в нем.

Интерпретация заключения в этом случае максимально проста:

• положительный результат свидетельствует о том, что микроорганизм присутствовал в анализируемом образце,
• отрицательный тест указывает на то, что инфекционный агент не был обнаружен.

Внимание! Отрицательный результат иногда является следствием неправильного забора материала или ошибок в процессе проведения анализа.

При наличии явных симптомов заболевания и подозрении на ложноотрицательный результат может быть целесообразно повторить исследование.

Проведение анализа ПЦР требует большой точности

В особых случаях используют количественные методы определения возбудителя. Результаты таких анализов выдаются в виде полученной концентрации ДНК или РНК возбудителя в пересчете на определенный объем материала. Например, в копиях молекул ДНК на миллилитр плазмы крови.

Количественный и полуколичественный анализ ПЦР и расшифровка его результатов выполняются для мониторинга течения заболевания, определения вирусной нагрузки, выявления стадии болезни, диагностики заболеваний, вызванных условными патогенами.

Положительные стороны диагностики методом ПЦР

Активное внедрение метода полимеразной цепной реакции в диагностику такого широкого спектра инфекционных болезней стало возможным благодаря целому ряду его преимуществ:

• высокая специфичность метода – анализ позволяет обнаруживать строго определенный вид ДНК возбудителей,
• возможность постановки анализа на поток и автоматизации процесса,
• высокая чувствительность метода и возможность диагностировать болезнь на ранних стадиях,
• диагностика одновременно нескольких инфекций;
• быстрота процедуры и небольшая стоимость расходных материалов.

К недостаткам метода можно отнести необходимость дорогостоящего оборудования, высокие требования к чистоте и технологичности лаборатории, возможность получения ложных результатов при несоблюдении методики анализа.

Современные высокотехнологичные методы лабораторного исследования позволяют определить болезни на начальной стадии. Инфекционные заболевания развиваются и эволюционируют, их становится все больше, а выявить их все сложнее. Диагностика методом ПЦР (полимеразная цепная реакция) является одной из самых новейших и высокоточных. За ее разработку ученый Кэри Мюллис был награжден Нобелевской премией.

Полимеразная цепная реакция – метод молекулярно-генетической диагностики, позволяющий найти у людей разные виды инфекционных и наследственных патологий, как в острой и хронической форме, так и задолго до того, как патология начинает себя проявлять. Большинство врачей сталкиваются с этим анализом ежедневно и уже не представляют, как без него возможно поставить правильный диагноз и стадию болезни.

Суть ПЦР-диагностики

При анализе ПЦР используются принципы молекулярной биологии. При его проведении используются специальные ферменты, многократно копирующие фрагменты РНК и ДНК, а также микроорганизмы, возбуждающие заболевания и находящиеся в биологических материалах человека. Копирование происходит в несколько этапов, поэтому образуется цепная реакция. После этого специалисты лаборатории делают сверку полученных данных с общей базой и выявляют возбудителей заболевания, а также их концентрацию. Диагностику проводят в специальном приборе, который производит охлаждение и нагревание пробирки с биоматериалом и называется амплификатор. Соблюдение температурного режима влияет на правдивость результатов анализа.

Фрагменты ДНК микроорганизмов могут содержаться в следующих биологических материалах:

• биологические жидкости;
• кровь и ее производные;
• соскоб эпителиальных клеток или мазок;
• моча;
• мокрота;
• слизь и другие биологические выделения;
• биопаты слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.

Где применяется диагностика методом ПЦР

Возможности диагностики инфекционных заболеваний с применением полимеразной цепной реакции велики, с ее помощью можно определить самые разнообразные вирусы, вызывающие такие инфекции как:

Это не полный список заболеваний, которые выявляются с помощью анализа ПЦР. Большинство этих патологий на ранней стадии практически незаметны, но последствия от их воздействия на организм крайне негативные и часто опасные для здоровья и жизни человека.

Беременным женщинам назначают анализ ПЦРК, чтобы выявить инфекции, передающиеся половым путем, значительно увеличивающие риск появления рака шейки матки, пагубно влияющие на протекание беременности и здоровье ребенка. Поэтому крайне важна диагностика ЗППП, чтобы не допустить заражение плода патогенными микроорганизмами.

Исходя из всего вышеперечисленного можно сделать вывод, что лабораторная диагностика с применением метода ПЦР помогает врачу установить точный диагноз и назначить эффективную терапию в каждом индивидуальном случае.

Это интересно! Помимо медицины метод ПЦР применяется и в других сферах, например, в криминалистике, когда необходимо выявить кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал, а иногда ПЦР используется для определения отцовства, для проведения опытов с мутацией ДНК и других экспериментов.

Плюсы и минусы метода

Преимуществами диагностики методом ПЦР являются:

• большая чувствительность теста позволяет определить даже единичные агенты возбудителя, что дает возможность выявить патологию на ранней стадии, при хронической и скрытой форме;
• универсальность метода позволяет использовать почти любой биоматериал для исследования от слюны до клеток кожи;
• большой охват – при исследовании одного образца возможно определить наличие нескольких разных возбудителей заболеваний;
• точность – высокий уровень этого метода обследования позволяет не выдавать ложных показателей;
• скорость – результат готов в среднем за пять часов, то есть пациент на другой день после сдачи биоматериала уже может забрать заключение;
• относительно невысокая цена – данный метод диагностики по стоимости не отличается от других лабораторных анализов крови;
• используя этот метод, можно сделать доклиническую и ретроспективную диагностику. Первая выявляет патогенные микроорганизмы еще до проявления заболевания, а вторая проводится после перенесенной патологии, что позволяет не дать патологии развиться и вовремя ее вылечить, а также определить латентную форму заболевания, протекающую без явных симптомов.

Но совершенных методов диагностики не существует, поэтому и у ПЦР есть минусы:

• высокие требования к соблюдению технологического процесса;
• высокие требования к профессионализму лаборантов.

Совет! Проводить подобный анализ лучше только в самых хороших и профессиональных лабораториях, где внедрены строгие системы контроля за качеством работы.

Для достоверности результатов необходимо соблюдать правила по предварительной подготовке к анализу:

• при сдаче слюны нельзя кушать и пить медикаменты за четыре часа до анализа, перед процедурой надо промыть рот кипяченой водой, после этого провести небольшой массаж кожи для того, чтобы выделился секрет из железы;
• мочу как правило собирают дома. Перед этим необходимо помыть половые органы и собрать в специальный контейнер 50 мл первой утренней мочи, нецелесообразно собирать материал при менструации;
• перед сдачей спермы мужчине нужно трое суток не вступать от половую связь, не посещать сауну, не купаться в горячей ванне, не принимать алкогольные напитки и острую еду. Непосредственно перед анализом запрещено мочиться три часа;
• для сдачи урогенитального мазка рекомендовано отсутствие половых связей на протяжении трех суток. За две недели до анализа запрещен прием антибактериальных лекарств. За неделю надо перестать пользоваться интимными гелями, мазями, влагалищными свечами, не делать спринцевание. Три часа до взятия биоматериала необходимо воздерживаться от похода в туалет.
• кровь сдается в утреннее время на голодный желудок.

Материал для диагностики должен собираться в условиях, которые исключают его загрязнение, так как это в значительной мере может повлиять на правдивость результата ПЦР.

Расшифровка анализа

Анализ может показать положительный или отрицательный результат. Отрицательный значит, что в организме предполагаемые инфекции отсутствуют и человек здоров. Положительный говорит, что пациент болен и ему необходимо лечение. Любые показатели должен расшифровывать и озвучивать врач. Не стоит расстраиваться и пугаться плохих результатов, на основании них назначается терапия, главное не затягивать процесс и не заниматься самолечением.

Понравилась наша статья? Поделитесь с друзьями в соц. сетях или оцените эту запись:

(Пока оценок нет)

Я врач терапевт, специалист широкого профиля. В моей компетенции находятся вопросы раннего диагностирования пациентов и лечения многих заболеваний желудочно-кишечного тракта, легких и дыхательных путей, печени, почек, сердечно-сосудистой и мочеполовой систем, кожных заболеваний, нарушений обмена веществ и пр. 15 лет опыта работы врачом терапевтом в поликлиниках Москвы, 5 из которых работал в одной больнице Санкт-Петербурга.. С радостью отвечу на вопросы читателей моего блога.

ПЦР диагностика (полимеразная цепная реакция) является одним из наиболее современных методов обследования в области молекулярной биологии и обладает некоторыми преимуществами перед другими методами.

Разберемся подробнее, ПЦР анализ – что это такое?

Из всех лабораторных исследований метод ПЦР принято считать одним из наиболее точных для диагностирования различных заболеваний, вызванных вирусами или бактериальными агентами. Кроме того, ПЦР диагностика становится доступнее с каждым днем, а повышенный уровень специфичности гарантирует точные и правильные результаты, исключая ложные ответы.

Кроме амплификации ДНК возбудителя, данный метод диагностики применяют для определения отцовства, клонирования генов, для выявления наследственных заболеваний и прочего.

Какие заболевания возможно диагностировать с помощью ПЦР?

Так что это такое: ПЦР анализ, и для чего применяют данный метод? Специалист может назначить проведение ПЦР для выявления разнообразных инфекций в организме бактериального или вирусного происхождения. Также с помощью ПЦР возможно обнаружить инфекции, имеющие хроническое течение или скрытое. ПЦР анализ эффективен даже если в организме находятся единичные клетки возбудителя.

В случае назначения ПЦР для выявления половых инфекций объектом могут быть хламидии, трихомонады, кандида, микоплазмы, уреаплазмы, возбудитель вируса папилломы и гонореи, гарднереллы.

Перед планированием беременности или при ее наступлении будущим родителям необходимо сдать анализы для ПЦР диагностики на наличие инфекционных заболеваний. Ведь планирование беременности — очень важный период жизни для будущей мамы и малыша, поэтому нужно отнестись к зачатию ответственно. Если все же в организме женщины и мужчины были выявлены возбудители инфекций, лучше отложить планирование беременности на время лечения.

Кроме инфекций половых путей, с помощью ПЦР можно обнаружить и другие возбудители, такие как:

• Наличие вирусов В и С в организме: ПЦР анализ поможет определить тип вируса, который является возбудителем гепатита еще до клинических проявлений заболевания; метод ПЦР поможет специалисту подобрать правильное лечение болезни и следить за его эффективностью;
• Наличие возбудителей туберкулеза: данный метод обследования может выявить такие формы туберкулеза, которые не смогут определить прочие лабораторные анализы; назначают проведение ПЦР, если у человека присутствует соответственная симптоматика, например, повышается температура тела, в дыхательных путях начинаются воспалительные процессы, отмечается положительная реакция при проведении туберкулиновой пробы;
• Вирус иммунодефицита человека;
• Вирус Эпштейна-Барра и цитомегаловирус;
• Хеликобактерии.

Как проводится анализ ПЦР?

Для представления о том, что это такое — ПЦР анализ, необходимо знать, как проводится данное исследование.

После взятия материала для исследования, его перемещают в специальный аппарат, куда помещают специальные ферменты, способствующие формированию генетического материала. После этого начинается копирование ДНК и РНК вируса, пока тот не возрастет до количества, при котором будет возможно выявить возбудитель заболевания.

У женщин наиболее часто воспроизводят забор материала из цервикального канала и уретры. В данном случае для верного результата очень важно подготовиться к проведению процедуры. Подготовка включает в себя следующее:

• За 3 суток до проведения анализа ПЦР женщине необходимо воздержаться от полового контакта;
• Перед проведением процедуры не следует мочиться;
• После окончания менструации должно пройти 4-5 дней перед исследованием.

Стоит отметить, что для взятия крови специальной подготовки не нужно.

Ответы ПЦР

Расшифровка ответов обычно готова на следующий день. Существует всего два результата: положительный (в случае наличия в организме инфекции) и отрицательный (если ДНК возбудителя не обнаружено).

При ответе на вопрос, что это такое — ПЦР анализ, можно однозначно сказать, что важность данного лабораторного метода исследования сложно переоценить. Такая диагностика сможет контролировать проведение назначенной терапии при вирусах и инфекциях, отдельно в случаях гепатита и ВИЧ.